تنظيف الأعمدة في الكروماتوغرافيا السائلة ذات الطور العكسي
سنستكشف نصائح بسيطة وفعالة لتنظيف الأعمدة، خاصة تلك الموجهة نحو الكروماتوغرافيا السائلة ذات الطور العكسي.
1. اتبع توصيات الشركة المصنعة: من الضروري الالتزام بإجراءات التنظيف الموصى بها من قبل الشركة المصنعة للعمود الخاص بك.
2. استخدم مذيبات التنظيف: استخدم 10 إلى 20 غ من مذيبات التنظيف خلال عملية التنظيف. فيما يلي التسلسل المقترح للأعمدة العكسية١) الماء: ابدأ بالماء للقضاء على الشوائب القطبية أو المركبات المستقطبة.٢) الميثانول: استخدم الميثانول بعد ذلك.٣) أسيتونيتريل (ACN): استخدم ACN كمذيب عضوي قابل للامتزاج، خاصة عند استخدام الهبتان.٤) الهبتان: استخدم الهبتان لإزالة الشوائب غير القطبية ذات التراكم العالي.٥) الإيزوبروبانول (IPA): استخدم IPA لسد الفجوة بين ACN والهبتان بسبب قابليته للامتزاج مع كلاهما.٦) اسيتونيتريل(مرة أخرى): واصل مع ACN.٧) اسيتونيتريل مع 0.1% حمض الفورميك: لتنظيف شامل، استخدم مرحلة متحركة حمضية.٨) الميثانول (مرة أخرى): اتبع بالميثانول.
3. حفظ في مذيب عضوي: للحفاظ على عمود الكروماتوغرافيا السائلة ذات الطور العكسي، قم بتخزينه في محلول يحتوي على 20% ماء و 80% ميثانول، خاصة عند استخدامه لتحليل البروتينات.
4. استعادة التدفق: إذا كان التدفق معوقًا بسبب استخدام العمود لفترة طويلة، فكر في استخدام محلول يوري بتركيز 5 إلى 10 مولر لتشويه البروتينات التي ترسبت على العمود. استعد التدفق عن طريق الغسيل باليوريا، تليها الميثانول-الماء المحمض أو الماء المحمض (حمض الخليك أو الفورميك لتحميض المرحلة المتحركة
5. التلوث بأيونات المعادن: في حالات الاشتباه بتلوث أيونات المعادن، استخدم EDTA كعامل تنظيف فعال. يمكن لـ EDTA تشكيل مركبات مع أيونات المعادن، مما يزيلها من العمود. بعد ذلك، اغسل العمود جيدًا بالماء للقضاء على EDTA.
6. اتجاه تدفق عكسي: خلال عملية تنظيف العمود، اعكس اتجاه التدفق لمنع الملوثات من عبور طول العمود بأكمله. عادةً ما تتراكم الملوثات بالقرب من المدخل، لذا يقلل عكس التدفق من الجانب الخارجي المسافة التي يحتاجونها للسفر.
7. توجيهات الشركة المصنعة والتكيف: دائمًا ما يجب أن تنظر في توجيهات الشركة المصنعة، حيث قد تختلف عدد أحجام الأعمدة وأوقات التنظيف بناءً على درجة التلوث.هذه النصائح البسيطة ولكن الفعالة لتنظيف الأعمدة ستساعد في الحفاظ على أداء وطول عمر عمود الكروماتوغرافيا السائلة ذات الطور العكسي الخاص بك.