أهمية تقليل الحجوم الإضافية في أنظمة الكروماتوغرافيا

تُعد الكروماتوغرافيا تقنية عالية الكفاءة، لذلك فإن أي حجوم “فارغة” صغيرة جداً داخل النظام تُسبب مشكلات كبيرة. من المثالي أن تكون كل مراحل النظام متصلة مباشرة ببعضها البعض لتقليل الحجوم غير الضرورية، حيث يؤدي أي مسافة إضافية يقطعها التحليل إلى توسيع النطاق (band broadening) من خلال آليتين رئيسيتين: الانتشار الطولي (longitudinal diffusion)، حيث تميل جزيئات التحليل إلى الانتشار في مناطق المذيب أمام وخلف النطاق الضيق، والتأثير التدفقي المكافئ (parabolic flow effect)، الذي يجعل الجزيئات القريبة من جدران الأنابيب تتحرك ببطء أكبر من تلك المارة في الوسط.أنواع الحجوم الإضافية وتأثيرها على التحليليُعرف الحجم (Extra-column volume) بأنه مجموع كل الحجوم خارج العمود نفسه، بما في ذلك الأنابيب والوصلات والمبادلات الحرارية وخلايا الكاشف. أما الحجم (Connection-dead volume) فينشأ من الوصلات غير المحسنة أو السيئة، مما يؤدي إلى تشكل تجاويف صغيرة يركد فيها المذيب ويسبب تشوهاً في قمم الذروة وذيولاً وتوسعاً في النطاق. وأخيراً حجم (Dwell volume)، وهو الحجم بين نقطة خلط المراحل المتنقلة ورأس العمود، وله أهمية خاصة في التحليلات المتدرجة (gradient) لأنه يؤثر على تركيب المذيب الذي يصل إلى العمود. يجب التحكم الدقيق في هذه الحجوم جميعها، خاصة في أنظمة UHPLC عالية الكفاءة، لأن أي تغير صغير قد يفسد التحليل بأكمله.