إنشاء منحنى المعايرة calibration curve باستخدام وظيفة التخفيف التلقائي في جهاز أخذ العينات التلقائي

في تحاليل الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء (HPLC)، يتم عادةً تحضير محاليل العياري والعينات يدويًا باستخدام الماصات، مما يجعل هذه العملية تستغرق وقتًا طويلاً وتتطلب جهدًا كبيرًا.

نظرًا لتزايد الحاجة إلى تحسين الكفاءة وتقليل الأخطاء البشرية، أصبح الاعتماد على الأتمتة في هذه العمليات أمرًا ضروريًا.تمتلك أجهزة أخذ العينات التلقائية Nexera Autosamplers وظيفة المعالجة المسبقة التي تؤدي تلقائيًا عمليات التخفيف وإضافة الكواشف والحقن المشترك.

يمكن استخدام هذه الوظيفة لإعداد عينات مخففة وفقًا لعامل تخفيف محدد وإدخالها مباشرة في عمود التحليل. يوضح هذا المقال طريقة بسيطة لإنشاء منحنيات المعايرة باستخدام وظيفة التخفيف التلقائي.

برنامج المعالجة المسبقة وآلية التشغيليتضمن ملف الطريقة معلومات مثل معايير الكروماتوغرافيا السائلة (LC)، ومعايير التحليل، وبرنامج المعالجة المسبقة. يسمح البرنامج بتحديد نسب تخفيف مختلفة، مثل التخفيف بمقدار 100 مرة.

يمكن استخدام ملف طريقة واحد، بغض النظر عن نسبة التخفيف، مما يمنع الأخطاء البشرية مثل أخطاء الإعداد.يتم تكوين نسبة التخفيف وظروف عملية المزج باستخدام برنامج LabSolutions™، حيث يُعرض إعداد المعالجة المسبقة في نافذة إعداد محددة. يتضمن البرنامج الأوامر التالية:

1. سحب كمية معينة من المحلول الأم (Stock Solution) وفقًا لنسبة التخفيف.

2. إضافة المحلول المخفف إلى قارورة الخلط (Mixing Vial).

3. خلط المحلول باستخدام وظيفة الشفط والتوزيع (Pipetting).

4. حقن كمية محددة من المحلول في عمود الكروماتوغرافيا للتحليل.قابلية التكرار (Repeatability)تم تحضير محلول قياسي تلقائيًا عن طريق تخفيف محلول كافيين بتركيز 250 مجم/لتر بمقدار 500 مرة باستخدام الماء النقي للغاية، ليصبح تركيزه بعد التخفيف 0.5 مجم/لتر.تم إجراء التحليل ست مرات متتالية، وكانت نسبة الانحراف المعياري النسبي (%RSD) للزمن الاحتفاظي ومساحة الذروة كما يلي:

الزمن الاحتفاظي: 0.02%مساحة الذروة: 0.96%منحنى المعايرة

تم إنشاء منحنى المعايرة لمادة الكافيين ضمن نطاق التركيز 0.5-50 مجم/لتر باستخدام وظيفة التخفيف التلقائي. أظهر المنحنى خطية ممتازة، حيث كانت معامل التحديد (R²) أكبر من 0.999، مما يعكس دقة وثبات النظام التحليلي.تحليل التخفيف التلقائي لمحلول قياسي من الكافيين

تم إجراء تحليل تلقائي للتخفيف لمحلول كافيين بتركيز 250 مجم/لتر، حيث تم تخفيفه 100 مرة باستخدام الماء النقي للغاية، مما أدى إلى تركيز نهائي قدره 2.5 مجم/لتر. أظهرت كروماتوغرامات التحليل دقة ووضوح الذروة للكافيين في الظروف التحليلية التالية:

عمود الفصل: Shim-pack™ GIST C18 (75 مم × 3.0 مم بقطر 2 ميكرون).

معدل التدفق: 0.6 مل/دقيقة.

الطور المتحرك:A: محلول فوسفات الصوديوم (10 ملمول/لتر، pH = 2.6)B: الميثانول

برنامج الوقت: تغير النسبة بين A و B لتحقيق أفضل فصل.درجة حرارة العمود: 40 درجة مئوية.حجم الحقن: 4 ميكرولتر.كاشف الامتصاص: 272 نانومتر.

إعداد جدول الدُفعة (Batch Table)يتم استخدام إضافة خاصة تدعى SIL Pretreatment Variable في برنامج LabSolutions™ لتحديد موقع قوارير المحلول الأم ونسبة التخفيف المطلوبة.

عند إدخال البيانات مثل رقم اللوحة، رقم القارورة، ونسبة التخفيف، يتم إعداد القوارير الفارغة للتخفيف التلقائي، وبمجرد بدء التحليل، يتم إنشاء منحنى المعايرة تلقائيًا.تحليل الكافيين في المشروبات

تمت دراسة محتوى الكافيين في الشاي الأخضر والقهوة التجارية.

تم ترشيح العينات باستخدام مرشحات غشاء 0.2 ميكرون ثم تخفيفها 100 مرة تلقائيًا باستخدام وظيفة التخفيف التلقائي.

أظهرت النتائج أن تركيز الكافيين بعد التخفيف كان:

الشاي الأخضر: 1.32 مجم/لتر (%RSD = 0.72%)

القهوة: 7.33 مجم/لتر (%RSD = 1.66%)

مكنت وظيفة التخفيف التلقائي في جهاز Nexera Autosampler من تحضير محاليل قياسية لمنحنى المعايرة عند نسب تخفيف مختلفة، مما أتاح إنشاء منحنى معايرة دقيق.

تظهر هذه الطريقة كفاءة عالية في تحسين الإنتاجية وتقليل الأخطاء البشرية، حيث أن كل ما يتطلبه الأمر هو تحضير المحاليل الأم للمعايير والعينات، بينما تتم بقية العمليات تلقائيًا.تُعد هذه المنهجية مفيدة للباحثين والمختبرات الراغبة في تبسيط وتحسين عمليات المعايرة باستخدام أجهزة HPLC المتطورة.